亲和力测定服务蛋白纯化技术

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　　一．蛋白质纯化技术
　　亲和力测定服务蛋白质的纯化主要内容是指利用要分离的多种蛋白质组分之间蛋白的性质差异，首先依据蛋白的质量相似性可以进一步去除其他非蛋白型物质，再分别根据蛋白质之间的差异性可以将目的蛋白分离提取出来。
　　二．蛋白纯化方法
　　1.标签纯化法：
　　标签分离纯化相对应用于其他蛋白质纯化检测方法来说，技术比较成熟，操作比较容易，理想的蛋白质标签应该具有至少以下这么几个共同特点：（1）标签对分离目标蛋白酶的基本结构类型和生化活性基本上没有产生影响作用；（2）标签比较方便切除；（3）样品最好是能经过一步的纯化处理即可得到超纯品；（4）产品应用领域范围更广，可分别适用于多种生物目标蛋白检测和基因表达诊断系统。纯化标签需要根据实际情况选择，下表是部分常用标签：
　　利用Halo-Tag酶基于化学共价的方式将融合蛋白质与特定化学物质之间实现共价结合
　　卡梅德针对蛋白纯化，提供丰富的标签选择，包括His、GST、 FLAG、SUMO等。可提供一系列树脂和磁柱等纯化产品，用于从大肠杆菌、哺乳 动物、酵母、昆虫表达系统中纯化重组蛋白。
　　2. 根据蛋白质分子大小差别的分离
　　（1）蛋白质膜超滤技术截留蛋白与透析：超滤截留技术一般是指通过利用超高压力场或离散心力，使大分子水凝胶粒子和较少量相对其他载体粒径较小的一点的溶质分子能直接截留通过半透膜，而无需把大分子蛋白质牢固留料在过滤膜片表面上，可实现随意的选择使用各种具有不同的截面孔径类型的过滤膜载体而分别截留于其自身不同孔径的各种分子量类型上的蛋白质。透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开。
　　（2）凝胶过滤法：凝胶网中孔分子的体积大小一定，只允许相应体积大小的小颗粒分子进入到凝胶颗粒网的内部，大部分颗粒被完全排阻在外。溶液分子流经层析柱面时，大点的溶质分子会先随洗脱液子一起从颗粒间隙向内流动沉积下来，小一点的溶剂分子会先在网状结构层流中的洗脱历程长，后被逐渐被洗脱液固定下来。
　　3. 根据蛋白质带电性质进行分离
　　（1）电泳法：不同种类蛋白质样品在同一溶液pH条件作用下,因样品分子量大小不同以及其携带的电荷数量分布的显著差异等而产生在毛细管电场环境中蛋白质的电子迁移率变化不同结果而分离。
　　（2）离子交换层析法：离子交换剂主要包括了有阳离子交换剂和有强阴离子交换剂，当需要分离的蛋白缓冲液流经某一个离子交换层析柱表面上时，带有与离子交换剂相反电荷的蛋白质被吸附在离子交换剂上，随后就可用适当地改变离子其的pH度值或适当调整离子强度办法来重新将新吸附固定的新的蛋白质从表面上洗脱了下来。