mRNA生产流程细胞培养入门指南：步骤与注意事项详解

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　　mRNA生产流程细胞培养基是细胞不可缺少的部分。今天围绕细胞培养，小蔚给结合自己多年的经验给大家讲讲细胞培养的步骤。让各位科研小伙伴在实验室也能顺利实验。
　　细胞培养的步骤
　　第一步：需要将超净台及所用仪器耗材进行紫外线灭菌，时间为30分钟。然后我们打开水浴锅预热至37度。将培养基放入37度的培养箱或水浴锅预热。
　　第二步：从夜氮罐中取出冻存细胞，然后将冻存细胞放置-80度的冰箱等5-10分钟。将细胞至于冰箱让管内液氮蒸发后再进行水浴可以避免水浴过程中发生安全事故。
　　第三步：用37度水浴快速融化细胞，待冻存细胞融化至仅有米粒大小冰块时停止水浴，融化时间通常在1分钟左右。这里建议将冻存的细胞装在透明的PE手套中进行水浴，这样可以有效避免水浴带来的污染。
　　第四步：将冻存管在150g条件下离心1-2min，注意参数约为90-1000rpm，不同离心机可能有差异，需提前设置好。
　　第五步：打开超净台取出预热好的培养基，然后用酒精喷洒消毒后放入超静台内，随后在培养瓶内加10毫升培养基。
　　第六步：离心完成后取出冻存的细胞，用酒精擦拭消毒后小心开启冻存管，弃上清，取细胞沉淀重悬后接种至培养瓶内，注意重悬吹打细胞力度不要过大，用十字法或八字法混匀细胞。
　　第七步：镜检确认细胞均匀分布在培养基后将细胞放置培养箱培养。