灌流工艺开发小鼠骨髓单核细胞操作方法说明

大海的鱼

　　灌流工艺开发小鼠骨髓单核细胞分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等；某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨质间的网眼中，是一种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，最后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。小鼠骨髓单核细胞骨髓单核细胞是一种未成熟的单核细胞，在骨髓细胞中约占0.04%，被认为是破骨细胞的前体细胞，较外周血单个核细胞诱导的破骨细胞得率高、全骨髓诱导法产生的破骨细胞数量多，纯度高，较脾细胞诱导法分化效率高。骨髓单核细胞（BMMNCs）是从股骨或胫骨骨髓中分离提取出来的原代细胞，它属干细胞类型。目前，大多数研究用淋巴细胞分离液分离提取骨髓单核
　　细胞，最近也有采小鼠骨髓单核细胞操作方法：
　　1.取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
　　2.待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
　　3.细胞传代
　　1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
　　2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；
　　3)用吸管轻轻吹打混匀，按1:2-1:3适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
　　4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。