mRNA生产流程收到细胞株该如何处理？

大海的鱼

　　1. 收到细胞，mRNA生产流程时间要镜检：观察细胞形态是否正常，对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否很好，观察细胞密度，有疑议及时咨提供细胞的技术人员。由于运输的时间或者温度的变化，很多贴壁细胞在盛满培养基的瓶子里生长的状态和平时会有点不一样，主要是贴壁牢固问题。比如293T，平时贴壁就不是很牢，在装满的培养基瓶子里面，会发生大片的脱落，细胞聚集在一起，但是细胞生长还是正常的，通过离心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的贴壁生长。
　　2. 当通过上一步的观察，细胞初步没有任何问题时，进行下一步操作。当收到的细胞密达到80%左右时，则处理如下：弃除瓶中大部分培养基，仅保留5到10mL培养所需的常规培养基；或更换新鲜的培养基，置于培养箱中，随后每天观察。细胞在低于正常生长温度情况下，会调整为静止期，或者慢速生长期，必须恢复37度的环境至少3个小时左右，才能重新调整到接近对数生长期的状态，在对数生长期进行细胞的传代会大大增加传代的成功率，和细胞的存活率。
　　3.如果经步观察发现细胞密度超过90%，并且细胞状态很好时，则复温后2个小时需要立即传代。传代的比例应依据不同的细胞而定。对于生长比较快，状态稳定，不易受外界影响的细胞可以一次多传几瓶；对于生长较慢，细胞比较薄，状态容易波动的细胞类型，一次少传些，保证每瓶细胞密度大些，便于稳定生长。至于一些比较陌生的细胞，次处理也可以依照第二种情况。
　　传代操作：
　　1. 吸除培养瓶内旧培养液。
　　2. 加入无菌pbs洗液（5-8mL）轻轻润湿细胞，稀释多余的培养基，之后吸走洗液，动作要轻，不可吹打到细胞。
　　3. 向瓶内加入含0.25%EDTA的胰蛋白酶混合液少许，以能覆满瓶底为限。
　　4. 置温箱中2——5分钟，一旦镜检发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，细胞变圆，比较松动后，立即终止消化。
　　5. 加入该细胞对应的培养基6mL（T25培养瓶）或12mL（T75培养瓶）终止消化。
　　6. 用吸管通过吸取的培养基轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时应尽量以少的次数将细胞从壁上吹下，不仅要控制吹打的力度、次数，还要注意要将细胞尽可能吹成单个。这样既能减少死细胞，又能便于细胞再次均匀贴壁生长。
　　7. 依据传代比例，将细胞悬液分瓶，再补充培养基后，静置于温箱培养，直止贴壁。