抗独特型抗体服务AchE活性分光光度法试剂盒测定操作

大海的鱼

　　抗独特型抗体服务测定原理：
　　AchE即乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase)，催化Ach水解生成胆碱，胆碱与二硫对硝基苯甲酸（DTNB）作用生成5-巯基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在412nm处有吸收峰，通过测定412 nm吸光度增加速率，计算AchE活性。
　　测定操作：
　　1. 分光光度计预热30 min，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。
　　2. 试剂二置于37℃水浴中预热30min。
　　3. 取1mL玻璃比色皿，依次加入100μL上清液、800 μL试剂一、50μL试剂二和50 μL试剂三，迅速混匀，于412nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。△A测定管=A2-A1。
　　AchE活性计算公式：
　　1. 组织AchE活性
　　（1）按照蛋白浓度计算
　　活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。
　　AchE酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷（Cpr ×V样）÷T
　　= 245×△A÷Cpr
　　（2）按照样本质量计算
　　活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。
　　AchE酶活(nmol/min/g鲜重)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷（W ×V样÷V样总）÷T
　　= 245×△A÷W
　　2. 细菌、细胞AchE活性
　　活性单位定义：每104个细胞每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。
　　AchE酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷（细胞数量×V样÷V样总）÷T
　　= 245×△A÷细胞数量
　　3. 血清AchE活性
　　活性单位定义：每毫升血清每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。
　　AchE酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷V样÷T
　　=245×△A
　　ε：TNB摩尔消光系数，13.6×103 L/mol/cm；V反总：反应体系总体积（L），1 mL=0.001 L；106：1mol=1×106μmol；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度（mg/mL）；W：样本质量，g；V样：加入上清液体积（mL），0.1 mL；T：反应时间（min），3 min。