CDMO公司白细胞介素-4的实验原理及样本处理

大海的鱼

　　CDMO公司白细胞介素-4是趋化因子家族的一种细胞因子。白细胞介素是由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类细胞因子。由于是白细胞产生又在白细胞间发挥作用，所以由此得名，现仍一直沿用。由白细胞产生又在白细胞间起调节作用的细胞因子。现在是指一类分子结构和生物学功能已基本明确，具有重要调节作用而统一命名的细胞因子，它和血细胞生长因子同属细胞因子。两者相互协调，相互作用，共同完成造血和免疫调节功能。白细胞介素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用。
　　现将工作原理公布如下: 采用双抗体夹心法测定大鼠白细胞介素 4(IL-4)水平。用纯化的大鼠白细胞介素 4(IL-4)抗体包被微孔板，制成固相载体，实验时依次在微孔板中加入样本及标准品，并加入 HRP 标记的白细胞介素 4(IL-4)抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，反复洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化为蓝色，再用硫酸终止反应，转变成。颜色的深浅和样品中的 IL-4 含量呈正相关。采用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度(OD 值)，根据标准曲线，计算测试样品中白细胞介素 4(IL-4)浓度。
　　白细胞介素-4样品收集、处理及保存：
　　1、细胞培养上清：适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液，以1000×g离心15分钟，收集上清。
　　2、细胞：用PBS反复洗涤细胞3次，调整细胞浓度达到104-106/ml 左右，通过反复冻融，使细胞破坏并放出细胞内成份，或者细胞超声粉碎，离心取上清液检测。
　　3、 血清：在室温下，血液自然凝固，以1000×g离心15分钟，取上清待测。
　　4、血浆：应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合后静置10-20 分钟后，1000×g离心15分钟，收集上清。
　　5、体液：包括胸腹水、脑脊液，分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集，以1000×g离心15分钟，收集上清。
　　6、组织标本：切取组织标本，称取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或匀浆器，或超声破碎仪将标本匀浆，以2000-3000rmp离心20 分钟，收集上清进行检测。
　　7、样品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
　　8、保存：如果样品不能立即检测，应将其分装，-70 ℃保存，避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。